一般底物效果时刻，以10-30分钟为宜。底物运用液有必要新鲜，尤其是H2O2在临用前参加。
BIM试剂盒进行各项试验条件的挑选是很首要的，其间包含:
固相载体的挑选：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。
其方法可所以凹孔平板、试管、珠粒等。现在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。
不管何种载体，在运用前均可进行挑选：用等量抗原包被，在同一试验条件下进行反响，查询其显色反响是不是均一性，据此判明其吸附功用是不是超卓。
包被抗体（或抗原）的挑选：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，央求纯度要好,吸附时一般央求PH在9.0～9.6之间。
吸附温度，时刻及其蛋白量也有必定影响,一般多选用4℃ 18～24小时。
蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定：即用不一样的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相一同，查询阳性标本的OD值。
挑选OD值zui大而蛋白量起码的浓度。
对于大都蛋白质来说一般为1～10μg/ml。
酶符号抗体作业浓度的挑选：首先用直接ELISA法进行开端效价的滴定（见酶符号抗体部份）。
然后再固定其它条件或选用“方阵法”（包被物、待检样品的参看品及酶符号抗体分别为不一样的稀释度）在正式试验体系里地滴定其作业浓度。
酶的底物及供氢体的挑选：对供氢体的挑选央求是价廉、安全、有明显地显色反响，而自身无色。
有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌效果，应留心防护。
有条件者应运用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是现在较为满意的供氢体。
底物效果一段时刻后，应参加强酸或强碱以连续反响。

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