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关于抗体和重组蛋白的安稳性
更新时间:2019-12-27      阅读:1268

    1. 收到抗体和重组蛋白后的操作
 
    收到抗体和重组蛋白后(大部分抗体和重组蛋白是溶液态),请必须在 4℃,12000rpm,离心 3 分钟,再打开管盖进行分装、溶解和保存(假如抗体和重组蛋白体积小于 50μl,请延长离心时刻至 5 分钟,以保证悉数抗体和重组蛋白均离心下来,干粉状况的同样适用)。抗体和重组蛋白运用特制的贮存管,只有在 12000rpm 离心 3 分钟,才能将附着在管壁或盖内的抗体和重组蛋白悉数离心下来(即使是在 10000rpm 离心也会离心不*,导致出现抗体和重组蛋白的量不足的现象)。请详细阅览说明书,并依照推荐的保存条件正保证存和运用抗体和重组蛋白。
 
    2. 抗体和重组蛋白的长时间保存

    关于大部分抗体和重组蛋白,比较合适的保存方法是:抗体分装后保存在-20℃,重组蛋白分装后保存在-80℃。
 
    1)防止将抗体和重组蛋白保存在自动除霜冰箱中,将抗体和重组蛋白保存在冰箱里层,防止温度改变形成重复冻融。

    2)分装的量以一次试验用完为好,少不能少于 10μl 每份。由于分装体积越小,抗体和重组蛋白的浓度越可能会受到蒸腾以及管壁吸附的影响。
 
    3)分装能够da程度的下降重复冻融对抗体和重组蛋白活性的危害,同时也下降了由于屡次从同一管中吸取抗体和重组蛋白形成的污染可能性。
 
    4)抗体和重组蛋白工作液应该当天配制当天用完,4℃ 保存尽量不要超过 1 天。

    5)复融后的分装抗体和重组蛋白假如一次用不完,将剩下母液保存在 4℃,防止再冻起来。

    3. 抗体和重组蛋白的运送条件

    一般的运送过程需求 1~2 周的时刻,所以是在低温 4℃ 的条件下来完成的。4℃ 运送首要的目的是为了防止重复冻融对抗体和重组蛋白活性的危害(假如运用干冰运送,那么收到时抗体和重组蛋白是冻起来的,为了分装就需求解冻,这就多了一次冻融的过程),所以运送过程中一般防止干冰运送。
 
    4. 抗体和重组蛋白的短期保存

    大部分 的抗体和重组蛋白收到后 4℃ 短暂保存 1~2 周,对抗体和重组蛋白活性没有影响。假如抗体和重组蛋白很快会运用(1~2 周内),推荐在 4℃ 保存,这是为了防止重复冻融对抗体和重组蛋白活性的危害。要害的一点是要根据说明书推荐的方法来正确的保存抗体和重组蛋白。

    5. 抗体和重组蛋白的安稳性

    1)抗体的安稳性是天然界长时间进化的成果,抗体是免疫系统中重要的分子之一,其安稳性是天然进化挑选的成果,在众多物种中,抗体分子构成了保守而安稳的结构。
 
    2)抗体的高 Tm 值,在室温下,甚至短时刻温度到达 50~60℃,抗体分子都能坚持正确折叠,坚持其应有的活性。
 
    3)抗体和重组蛋白的纯度。选用先进的抗体和重组蛋白纯化技能,保证抗体和重组蛋白产品的高纯度,保障其抗体和重组蛋白产品的安稳性。
 
    4)抗体和重组蛋白的浓度。高浓度的抗体和重组蛋白产品可减少容器外表吸附形成的物质丢失,高浓度的抗体和重组蛋白安稳性更好。大部分抗体和重组蛋白浓度为 1 mg/ml,抗体和重组蛋白纯度高,特异性好,效价更高。

    6. 重组蛋白的特性

    重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存方法,原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状况,真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存,这样使得重组蛋白十分安稳,在-80℃ 条件下可保存数年。冻干粉在运用前需进行溶解,其中溶解的办法十分要害,由于溶解不好会下降蛋白的效用。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释运用过程中也需求细心注意,这些都是用户在实践使用中经常遇到的问题。
 
    1)原核细胞表达的重组蛋白。大肠杆菌表达的冻干重组蛋白,现已从包涵体中提纯,添加了蛋白保护剂,运用过滤后的无菌水作为复溶剂即可,复溶冻干蛋白 100 μg,用 86μl 的超纯水,轻轻摇晃使蛋白溶解,再用移液枪的枪头轻吹几下即可*溶解,一定不能运用涡旋仪进行快速振动或剧烈摇晃。
 
    2)真核细胞表达的重组蛋白。有活性的蛋白质不仅要转录和翻译,还要进行翻译后的加工,使得蛋白质的空间折叠方法坚持正常,所以重组蛋白必须在真核细胞中进行,如哺乳动物细胞能够识别和去除基因中的内含子,对翻译后的蛋白质进行加工,这样表达的蛋白质具有生物活性。咱们用溶液态来保存,坚持了其良好的活性和安稳性。
 
    3)重组蛋白的保护剂。在冻干和贮存过程中常用的保护剂或安稳剂有糖类,多元醇,聚合物,外表活性剂,某些蛋白和氨基酸等。咱们通常加 8%(质量比体积)的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可显着阻挠蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集,甘露醇也是一种遍及使用的冻干保护剂和填充剂。

    无论是保存还是运送,请防止重复冻融。重复冻融,冰晶会破坏抗体和重组蛋白的空间结构,导致蛋白变性构成多聚体和重组蛋白构象改变,然后下降抗体的结合能力,也加快了抗体球蛋白和重组蛋白的降解速度。抗体和重组蛋白保存妥当与否,直接决定了抗体和重组蛋白的活性运用作防止将抗体和重组蛋白保存在自动除霜冰箱中,将抗体和重组蛋白保存在冰箱里层,防止温度改变形成重复冻融。假如保存妥当,抗体和重组蛋白活性大部分都能够坚持数年。

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