细胞悬液是指single cell suspension。一般就是指把贴壁培养的细胞消化吹打以后形成的悬液,一般会吹打多次,使粘连的细胞都分开。当然,本身是悬浮培养的细胞的话,就不用消化了。
制备细胞悬液
(1)用75%酒精棉球消毒超净工作台台面,然后用75%酒精棉球消毒双手及暴露部位;
(2)用75%酒精棉球消毒各培养用液的瓶盖以及培养瓶瓶盖部位,并在酒精灯外焰上方一过,拧开瓶盖,将瓶口再在酒精灯外焰上方一过后,拧上瓶盖,但不要拧紧,以便下步操作;?
(3)轻轻将细胞培养瓶内旧培养液倒入烧杯中,注意不要让瓶口碰到烧杯,不要让液体溅出;
(4)吸取PE液3ml加入瓶内,加入时注意从侧面加入而不能直接冲细胞贴壁处,避免造成细胞脱壁,然后盖上盖子,平放轻摇40下,轻轻倒出,要求倒干净;
(5)加入0.3ml的0.25%胰蛋白酶液,加入时直冲细胞贴壁处,平放轻摇,使酶液漫过整个瓶底部,一分钟之内将培养瓶放在倒置显微镜台上进行观察,可发现细胞质渐渐回缩,细胞间隙增大,细胞慢慢变圆,用手掌拍打瓶底和瓶侧,使细胞从瓶壁上脱落下来并分散,呈悬浮状;
(6)立即加入5mlMEM+10%小牛血清,用吸管向瓶壁轻轻吹吸几次,从培养瓶底部一边开始到另一边结束,以确保所有底部都被吹到,使细胞全部从瓶壁脱落并形成均匀的细胞悬液;