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小鼠白介素1β试剂盒操作原理
更新时间:2011-09-27      阅读:2133

                           小鼠白介素1β试剂盒操作原理

本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:                                                          96T
2.5ng/L-80ng/L
 
使用目的:
小鼠白介素1β试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中白介素1β (IL-1β)含量
实验原理
   小鼠白介素1β试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠白介素1β (IL-1β)水平。用纯化的小鼠白介素1β (IL-1β)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白介素1β (IL-1β)再与HRP标记的白介素1β (IL-1β)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的白介素1β (IL-1β)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠白介素1β (IL-1β)浓度。
小鼠白介素1β试剂盒操作步骤
1.         标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

80ng/L
5号标准品
150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
40ng/L
4号标准品
150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
20ng/L
3号标准品
150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
10ng/L
2号标准品
150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
5ng/L
1号标准品
150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

 2.         加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.         温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  
4.         配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5.         洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.         加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.         温育:操作同3。
8.         洗涤:操作同5。
9.         显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.     终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.     测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;2-8
2.有效期:6个月
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