目的 分析过敏性紫癜(HSP)患儿急性期血清白细胞介素(IL)-10、IL-13、IL-15的水平变化及其与部分免疫学指标的关系,探讨其临床意义。方法 取40例已确诊的HSP患儿血清,其中19例为有肾损害组,21例为无肾损害组;同时取20例健康儿童的血清。采用双抗体夹心ELISA法分别检测3组血清IL-10、IL -13、IL -15的含量。结果 HSP患儿血清IL-10、IL -13、IL -15水平均显著高于正常对照组(P<0.01),肾损害组血清IL-10、IL -13、IL -15水平均明显高于无肾损害组(P<0.05);HSP组IgA 含量显著高于对照组,且肾损害组IgA含量明显高于无肾损害组(P<0.05)。经相关性分析IL-10、IL -13、IL -15与IgA明显相关。结论 HSP存在细胞免疫与体液免疫功能紊乱,血清IL-10、IL -13、IL -15及IgA与HSP、紫癜性肾炎(HSPN)的发病过程密切相关。
过敏性紫癜(henoch -schonlein purpura,HSP)是小儿时期zui常见的小血管炎综合征之一,也是继发性肾脏损害的主要原因,可由多种因素引起,目前病毒感染是zui常见的病因[1]。临床主要表现为血小板不减少性皮肤紫癜,常伴有消化道症状(腹痛或便血)、关节症状、肾脏症状(蛋白尿或血尿)。该病容易反复发作,且易累及肾脏引起紫癜性肾炎(HSPN)。HSP在大多数情况下是一种自限性疾病,但是长期预后取决于其肾损害的严重程度[2]。该病发病机制仍不清楚,但已经明确它是一种系统性免疫复合物性疾病,多为IgA循环免疫复合物相关的小血管及毛细血管损害[3]。为探讨白细胞介素(IL)-10、IL-13、IL -15与HSP、HSPN发病机制及某些免疫学指标的关系,本研究对2010年9月-2011年5月在我院住院的40例确诊为HSP的患儿及20例健康儿童血清进行了检测,现报告如下。
1 材料和方法
1.1 研究对象
根据《诸福棠实用儿科学》第7版HSP诊断标准,选择我院儿科2010年9月-2011年5月确诊为HSP的住院患儿40例,男20例,女20例,年龄3~14岁,平均(8.4±3.1)岁。根据皮疹消退前和消退后2周内有无肾脏受累的临床证据分为有肾损害组和无肾损害组,诊断标准根据中华医学会儿科学分会肾脏病学组“紫癜性肾炎的诊断与治疗”的建议[4]。其中有肾损害组19例,男10例,女9例,年龄5~14岁,平均(8.6±2.9)岁;无肾损害组21例,男10例,女11例,年龄3~12岁,平均(8.1±3.3)岁。排除使用过甾体类或非甾体类抗炎药物及激素的患儿。正常对照组20例,系同期体检健康儿童(无任何感染及系统性疾病的儿童),男女各10例,年龄4~14岁,平均(8.3±0.7)岁。实验组与健康对照组在性别和年龄上差异无统计学意义。
1.2 仪器与方法
分别取HSP患儿和正常儿童静脉血2mL,即刻放入无任何添加剂的真空采血管中静置30min,3000r?min-1离心15min后收集血清,置-80℃冰箱冷藏备用。采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)分别测定血清IL-10、IL-13、IL-15含量。试剂盒由上海森雄科技有限公司提供,灵敏度为8 pg?mL-1,操作步骤严格按试剂盒说明书进行,酶标仪为芬兰DENLEY DRAGON Wellscan MK 2型。免疫球蛋白(Ig)A、Ig G、Ig M、C3采用免疫散射比浊法测定。
1.3 统计学方法
采用SPSS 17.0统计软件;非正态分布数据,以中位数(四分位数间距)表示,两独立样本比较采用Wilcoxon秩和检验;正态分布数据以均数±标准差(x-±s)表示,两独立样本比较采用t检验,采用Spearman作相关性分析,P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 HSP组与正常对照组血清IL-10、IL-13、IL-15检测结果
HSP急性期患儿血清IL-10、IL-13、IL-15的含量均显著高于正常对照组的含量,见表1。
2.2 HSP患儿有肾损害组与无肾损害组血清IL-10、IL-13、IL -15检测结果
HSP患儿有肾损害组血清IL-10、IL-13、IL -15的含量明显高于无肾损害组的含量,见表2。
2.3 HSP组与正常对照组IgA、Ig G、Ig M、C3的检测结果
HSP患儿仅有IgA的含量明显高于正常对照组的含量, Ig G、Ig M、C3的含量与正常对照组的含量比较无统计学意义,见表3。表1 HSP患儿急性期组与正常对照组血清IL-10、IL-13、IL -15水平的比较表2 HSP有肾损组与无肾损组血清IL-10、IL-13、IL -15水平的比较
2.5 相关性分析
将IL-10、IL-13、IL -15分别于IgA作相关性分析,呈明显正相关(r=0.578、0.439、0.501,P<0.01)。
3 讨论
近年来,由于大量研究表明HSP 存在细胞免疫功能低下,体液免疫功能亢进,使细胞因子与T细胞与B细胞之间的相互关系成为研究热点。HSP及HSPN患儿均存在细胞因子分泌紊乱的现象[5-6]。IL-10和IL-13主要是由活化的Th2细胞产生的能抑制多种细胞因子分泌的抗炎性细胞因子。在本研究中,HSP患儿急性期血清IL-10和IL-13显著高于正常对照组,推测这些因子在HSP发病过程中反馈性增高,发挥一定的保护作用。IL-10可以抑制IL-1、IL-6、IL-8、IL-12、TNF-α、粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)等炎症性细胞因子的基因转录和蛋白合成,从而起到抗炎作用。IL-10还具有减弱TNF-α表面受体的表达及抑制其释放的功能,使其致炎作用减弱。IL-13可以抑制活化单核细胞产生IL-1α、IL-1β、IL-6、TNFα等炎性细胞因子及巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α)、IL-8、IL-10、IL-12、GM-CSF、G-CSF等化学趋化因子,抑制这些细胞因子的基因转录,从而起到抗炎作用。IL-13可下调IFN-α、IL-12α、β链的转录水平,增强IL-1受体拮抗剂(IL-1ra)产生,而IL-1ra可阻断IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8发挥抗炎活性。
IL-15是一种Th1型细胞因子,它可以促进Th0向Th1转化;IL-15可增加bcl-2基因的表达,起到间接抑制淋巴细胞凋亡的作用,致使外周自身反应性B细胞增多,导致免疫球蛋白产生增多,免疫复合物增多,从而促使HSP的发生发展。IL-15与CD40配体协同诱导B细胞增殖和分泌IgM、IgG1、IgA以及低水平的IgG2,使体液免疫功能亢进,导致免疫复合物增多,促进血管炎的发生。IL-15能单独或与其他因子协同使募集到的T细胞获得单核或巨噬细胞诱导分泌TNF-α的能力,从而启动包括IL-1、IL-6、IL-8、GM-CSF、MIP-Iα、MIP-Iβ等一系列下游因子在内的炎症反应,促进HSP的发生。因此,IL-15在HSP患儿急性期会升高。HSP患儿细胞因子分泌的紊乱导致了Th1/Th2之间的失衡。
免疫复合物诱导性肾脏损伤是HSPN的主要发病机制,是儿童继发性肾小球疾病中的一个重要类型,也是小儿终末期肾脏病的重要原因,是引起本病死亡的主要原因。本文进一步研究了HSP患儿血清IL-10、IL-13、IL-15水平与肾损害发生的关系。结果显示,临床发生肾损害者IL-10、IL-13、IL-15水平均明显高于无肾损害者。对于HSPN活动期IL-10和IL-13产生增多的原因,可能是因为HSPN中由于肾脏原有细胞和局部浸润的炎症细胞所分泌的炎症介质增加,单核细胞(PBMC)在这些介质刺激后被活化,从而诱导IL-10和IL-13的产生增多。增多的IL-10和IL-13又可以通过抑制巨噬细胞等一些炎症细胞的浸润及炎症介质的释放,同时也相对抑制Th1细胞的作用,从而维持T细胞亚群功能的平衡。IL-15可刺激T、B淋巴细胞和NK细胞的增生活化,促进B细胞分泌免疫球蛋白,增加免疫复合物在肾脏的沉积。此外,Eini H[7]等研究提示肾细胞可表达IL-15和IL-15受体(IL-15r),尤其是在免疫介导的肾脏疾病中,肾细胞分泌的IL-15导致肾间质淋巴细胞的活化和增生,进而引起间质损伤,这也可能是HSP肾损害组 IL-15含量明显高于无肾损组的原因。IL-15可明显增加微小病变型肾小球肾炎中肾小球通透性因子(VPF)的释放,而VPF是一种淋巴因子能导致肾血管通透性增高、尿蛋白增多,同时VPF也是局灶节段性肾小球硬化蛋白尿产生的主要原因。因此提示IL-15通过多途径参与了HSPN的发病过程。
HSP的患儿体液免疫功能上调,B细胞呈多克隆活化,尤以IgA为主[8]。本研究中,HSP患儿IgA含量明显高于正常对照组含量,IgG、IgM与对照组比较差异无统计学意义。与之前学者们的研究相符[9]。大量研究表明HSP患者血中IgA明显增高[10-12],皮肤、肾脏及消化道黏膜中也均有IgA沉积[13],这可能与黏膜免疫系统对进入自身的抗原产生免疫应答有关,致使IgA增多。另外肾小球及系膜区也有IgA的明显聚集,提示其在HSPN的形成过程中可能有一定的致病作用。另有研究认为IgA分子的异常糖基化可减少肝脏对血清中IgA的清除,从而使其血浓度升高,增多的 IgA与肾小球系膜细胞、细胞外基质的结合从而引起炎症反应。也有研究提示IgA糖基的改变,使IgA可识别肾小球膜上内源性的凝集素并与之结合,引导IgA的沉积。本文还对IgA与IL-10、IL-13、IL-15进行了相关性分析,IgA与IL-10、IL-13、IL-15均明显相关,进一步说明了它们共同参与了HSP发病过程。急性期HSP患儿补体含量与对照组没有明显区别,不支持补体激活在HSP发病中起作用。