elisa试剂盒标本采集和保存

◎可用作 ELISA的标本十分广泛，体液（如血清，血浆，各种积液），分泌物（如唾液）和排泻物（如粪便，尿液）均可作为标本以测定其中 的抗原或抗体成分，一般使用血清。
n 标本采集时应尽量避免溶血，因红细胞破裂可释放过氧化物酶活性物质干扰立可读方法的结果，可造成假阳性；长菌的标本同样的道理易 产生假阳性。
◎抗凝不*的标本因纤维蛋白元的干扰而造成假阳性，建议尽量不用抗凝血尤其是用肝素抗凝剂。
◎标本在冰箱中保存时间过长易导致血清IgG聚合，使间接法的试剂本底加深，一般血清置4℃冰箱5天内完成测试。如需保存一周以 上则要-20℃冰冻保存，融解时应上下颠倒充分混匀，同时避免气泡。
◎ELISA的灵敏度>1ng/ml水平上,标本间的污染要尽量避免，尤其不应与生化试验用同一管标本.zui起码应先做免疫 后做生化.
附：内外干扰物质的影响分析
溶血 脂浊 RF 自身抗体 AFP 补体 & nbsp; 肝素 ; EDTA
A 0.165 0.200& nbsp; 0.250 &n bsp; 0.264 &nb sp; 0.186 0.146 0.183 0.126
S 0.023 0.016& nbsp; 0.007 &n bsp; 0.029 &nb sp; 0. 010 0. 007 0.019 &nbs p; 0.013
A对照0.151 0.195 ;0.195 0.195 & nbsp; 0 .116 0.116 0.116 0.116
S 0.038 0.008& nbsp; 0. 008 0.008 &nbs p; 0.018 0.018 &n bsp; 0.018 0.018
P > 0.05 > 0.05 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 <0.01 <0.01

 ELISA试剂盒操作流程：
1. 根据需要，将若干孔德条带放置在支架上；

2. 将标本、阴性质控、阳性质控以及标准品作 1：200 稀释（将５μｌ样品加稀 释液稀释到 1ml，混匀） ；

3. 取 100μl 已稀释的血清样品、标准品和阴性质控、阳性质控加入相应得孔板 内（质控和标准品至少需做两孔） ，A1 孔不加液体作为空白底色；

4. 在 37℃温箱中放置 30 分钟；

5. 到时间后将孔被液体甩去，并用 1X 洗涤液反复清洗 4 次，zui后用蒸馏水洗 一次；

6. 在每孔内加 100μl 酶结合物（需按比例稀释，除 A1 孔外） ，轻微混匀；

7. 在 37℃温箱中放置 30 分钟；

8. 甩去孔内酶结合物，用 1X 洗涤液反复清洗 4 次，zui后用蒸馏水洗一次； （包括 A1 孔也加） ，轻微

9. 在每孔内加 100μlTMB（使用前混合Ａ液和Ｂ液） 混匀；

10. 37℃放置 15 分钟； ，轻微混匀；

11. 每孔加 50μl 1N 硫酸终止液（包括 A1 孔）

12. 在 15 分钟内，用酶标仪在 450nm 处读取吸光度值（OD 值） （将酶标仪 A1 孔设定为空白孔） 。

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