染色过强原因 解决方法　　
a 抗体浓度过高或孵育时间过长 降低抗体滴度、抗体孵育时间：室温1小时或4度过夜　
b 孵育温度过高超过37度 一般在室温20-28 　　
c DAB显色时间过长或浓度过高 显色时间不超过5-12分钟，以显微镜下观察为准　　
2、非特异性背景染色　　
原因 解决方法　　
a 操作过程中冲洗不充分 每步冲洗3次每次5分钟　　
b 组织中含过氧化物酶未阻断 可再配置新鲜3%H2O2封闭孵育时间延长　　
c 组织中含内原性生物素 正常非免疫动物血清再封闭　　
d 血清蛋白封闭不充分 延长血清蛋白封闭时间　　
3、染色弱　　
原因 解决方法　　
a 抗体浓度过低、孵育时间过短 提高抗体浓度、孵育时间不能少 于60分钟　
b 试剂超过有效使用时间 应更换试剂　　
c 操作中添加试剂时缓冲液未沥干 每步滴加试剂前沥干切片中多余的缓冲液　　使试剂稀释 （应防止切片干燥）　　
d 室温太低 低于15度 要改放在37度孵育箱孵育30-60分钟或4 度冰箱过夜　
e 蛋白封闭过度 封闭不要超过12分钟　　
4、染色阴性　　
原因 解决方法　　
a 操作步骤错误 应重试 设阳性对照　　
b 组织中无抗原 设阳性对照以验证试验结果　　
c 一抗与二抗种属连接错误 仔细确定一抗二抗种属无误

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