ELISA新方法酶循环法
此法是Serf于1985年建立。在反应系统中,AP并不直接催化底物显色,而是使底物NADP+(辅酶Ⅱ)脱磷酸,NAD+(辅酶1)。NAD+活化第二酶系统——醇脱氢酶和黄递酶(diaphoras)催化的氧化还原循环(redoxcy cycle),NAD+还原为NADH,乙醇被氧化成乙醛。
NADH还原四氮唑盐深蓝色的可溶性甲谮(入max二492nm)。此反应系统具有较强的放大效应,对AP信号的放大比一般KLISA至少强250倍。
Johannsson等将上述反应系统引入双抗体夹心ELISA法,用于检测促甲状腺激素(TSH),敏感性可达pU/L,即每孔(100rtl)约2.8X104个TSH分子。
据Seth等研究认为,此种新型ELISA在敏感性、特异性、测定速度及简便程度等诸方面均优于放射免疫测定。反应的zui终产物甲腊的zui大吸收波长(492nm)又在现有酶标仪的读数范围,检测时无需增添新设备。
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