Protein A亲合膜色谱法
膜色谱采用具有一定孔径的膜作为介质,连接配基,利用膜配基与蛋白质等目标作用进行分离纯化,当料液以一定流速流过膜的时候,目标分子与膜介质表面或膜孔内基团特异性结合,而杂质则透过膜孔流出,待处理结束后再通过洗脱液将目标分子洗脱下来.Protein A能与人IgG分子的Fc段结合,但只结合其中的IgGl,IgG2和IgG4亚类,不能结合IgG3亚类[1“15].用木纤维与甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)共聚接枝形成含有活性环氧基团的复合介质,经过
处理后,制成膜装入①16 mm×6 mm的柱中,共装膜片20层,然后用0.15 mol/L NaCI的0.02mol/L pH7.4的磷酸盐缓冲液平衡柱子备用.将
2 mL血浆用0.15 mol/I。NaCl的0.02 mol/LpH7.4的磷酸盐缓冲液稀释一倍,以2 mL/min的速度循环上样5 min,用0.2 mol/L pH2.3的甘
氨酸--HCI缓冲液洗脱.洗脱峰的峰形较好,拖尾不严重.用毛细管电泳对纯化的IgG进行分析,纯度达到98%以上
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