噬菌体在微生物界同样存在类似动植物界的食物链一样的关系,噬菌体滴度是如何测定的呢?再次与朋友见面就已经是2014年了,我公司的跨年*也已经圆满的结束了,而现在才是新年的开始,购我公司产品立送精美台历一个哦!下面来看看今天上海恒远为您特别分享:测定噬菌体滴度的方法。
在宿主细胞过量的情况下,噬斑的数量随着噬菌体的增加呈线性增加。由于这个原因,在感染以前,要将噬菌体进行稀释,而不是将宿主细胞稀释。以低MOI(感染重复性)铺板,也可确保每一个噬斑仅包含一个DNA。
材料和试剂:
1、微波炉;
2、LB/IPTG/Xgal培养 板;
3、lb培养基;
4、顶层琼脂糖凝胶。
操作步骤:
1、在5~10ml LB培养基中接种单个ER2537克隆,振摇孵育直至对数生长中期(OD600~0.5)。
2、在细胞生长时,微波融化顶层琼脂糖凝胶,分装至无菌培养管内,每管3ml。维持在45℃备用。
3、37℃预热LB/IPTG/Xgal培养板,备用。
4、以LB培养基10倍比稀释噬菌体。
建议稀释范围:对扩增的噬菌体培养上清,108-1011;对未扩增的筛选洗脱液,101-104。每次稀释都换用新的加样枪头,使用气溶胶阻隔枪头以避免交叉污染。
5、一旦ER2537培养物长至对数生长中期,分装至微量离心管中,每管200ml。
6、将倍比稀释的噬菌体上清加入含细菌培养物的微量离心管中,一支微量离心管中仅加入一种稀释液10ml,快速涡旋,室温孵育1-5min。
7、转移至含有45℃顶层琼脂糖凝胶的管中,快速涡旋混匀,立即倾倒至预热的LB/IPTG/Xgal平板上,轻缓摇动平板使顶层胶均匀分布。
8、冷却平板5min,37℃倒置培养过一个夜。
9、噬斑计数以噬斑数为100左右的平皿为准,噬斑数乘以稀释度即可获得每10ml噬菌体的滴度-噬斑形成单位(pfu)。
朋友们,以上就是测定噬菌体滴度的方法啦,测定试验过后记得把结果与心得记录下来哦!这里是上海恒远ELISA试剂盒供应商,感谢朋友们对我公司的支持!