本学期就要结束了,科研时节忙碌纷纷,不少客户们正在准备即将开始的实验与春节后的试剂盒预购。ELISA实验得以大家的喜爱是因为其有着高灵敏、高特异性、准确性好等特点。
近日,我公司何在售后服务问题处理过程中,接到了曹老师的,曹老师说:“ELISA方法的准确性一般会用LC、LC-MS或者LC-MSMS做验证,因为我的方法涉及到小分子药物的衍生测定,所以液相的方法达不到回收率,请问有没有其他的方法可以用来验证ELISA方法的准确性呢?有没有这种可能是我的药物衍生体系本身这种方法与液相的流动相冲突,不适合用液相去测定?"
对曹老师的疑问,上海恒远技术专员做出的细致的分析:
通常用ELISA方法检验出来的阳性样品,需要用LC、LC-MS、GC-MS或者LC-MSMS做确证,因为ELISA方法的存在约5%左右的假阳性。究竟用上述的哪一种方法去确证其准确性,是要根据被测组分的理化性质决定的,例如组分在300度也不能够汽化,肯定不能用GC-MS;组分结构中有共轭,存在 n→π跃迁,π→π跃迁,一般会用HPLC紫外检测器;若组分具有荧光或者通过衍生化反应可以定量产生具有荧光的物质,则会用HPLC荧光检测器。以此类推,究竟用什么方法确证取决于被测组分的理化性质,而不是凭空想象。