近日,我司技术部反应,有不少客户在Elisa试剂盒洗涤步骤中容易出错,从而导致对实验结果的影响。上海恒远技术员根据自身多年经验分析Elisa洗涤,在这里分享给各位朋友们!希望能够给您的实验带来帮助。
洗涤步骤可降低未结合抗体所引起的背景信号,从而增加分析的信噪比。每一步之间的洗涤确保只有特异的结合事件被保留,在zui后一步产生信号。而不充分的洗涤会导致差异和高背景,从而带来不理想的结果。本文将为你介绍一些利用自动洗板机来洗涤Elisa平板的技巧。
第二个影响洗涤效果的主要参数是洗涤循环的量。当然,洗涤次数越多,背景越低。然而,太多次的洗涤会降低信号强度,使其难以测定。通常的做法是在每次抗体或抗原孵育后重复洗涤三次。不过,Elisa板的商会对洗涤次数提出建议。一般而言,商包被平板需要的洗涤次数比用户包被的平板要少。对于用户包被的Elisa板,必须优化洗涤次数。
控制洗涤量和洗涤次数的另一种方法是加入过量的洗涤液。一般来说,96孔板的每个孔能容纳330至460μl。不过,有些自动化洗板机可设置程序,分配远远超出这个量的洗涤液,比如1ml。它是如何做到的呢?其实很简单,就是在分液的同时打开吸液功能。换句话说,随着分液器分配更多的液体,抽吸器也将液体吸出。这种技术能增加洗涤量,但不会溢出到其他孔中。
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