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七夕前夕,ELISA试剂盒实验为你节约时间和她(他)约会吧!
更新时间:2017-08-22      阅读:923

                

    ELISA试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。

如何缩小ELISA实验中的误差呢?

要从自然因素(试剂稳定性、准确率、仪器精密度)和人为因素(操作者)两个方面入手:

(1)检验技师应具备从事实验室操作的基本素质和实践经验。能熟练操作实验仪器、器械,具有一定总结和分析问题的能力,对实验中出现的意外情况能及时妥善解决。

(2)使用校对过的微量移液器,排除自然误差。移液器准确与否对定量检测尤为重要。

(3) 评估试剂的实用性。试剂的稳定与否,对准确率的高低到头重要。在试剂启用前,应进行阴、阳对照及样品反复比照试验,判定试剂符合要求后方可使用。

(4)操作前仔细阅读说明书。严格按照说明书要求进行规范化操作。不同批号的试剂不可混用。值得改进的地方,反复试验确定成立后才能改进,比如洗板次数的掌握等。

(5) 加样要准确、快速。化学理论表明,物的量与反应物的量成正相关。加样不准确,酶物的量不能确定,直接影响显色结果。另外,显色的深浅及A值的测定与加入显色剂和终止液的量有关,所以加样应慎重。要求在一定时间内加样完毕的实验,如果加样迟缓,便出现误差,而且试剂长时间暴露在外,尤其室温过高时,保存期会缩短甚至失效。

(6)洗涤*。洗板不*,酶结合物本底显色会呈现假阳性。另外,洗涤液要新鲜,现用现配,陈旧的洗涤液会出现本底增高现象,也可能出现假阳性。

(7)严控反应时间。反应时间过长,酶失活;反应时间过短,酶结合物不能与血清中的微生物抗原抗体充分结合,物结构松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假阴性。

(8)严格掌握显色时间。显色时间过短,加入终止液反应终止后,底物结合物的量过少,易出现假阴性。超过显色要求时间后显色,应判为假阳性,这可能与试剂本身有关。加显色剂后立即显色,不可报阳性,这可能是本底显色的结果。

(9)注意试剂保存期,过保存期的试剂不能使用。

   

    结合以上几点,使我们在为客户测定试剂时大大提高了结果的真实度,及其快捷度,为客户提供了方便,减少了实验周期,想要实验真实可靠,务必按照此实验要素执行,方可解决实验中务必要的麻烦,为您节约时间。

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