叶绿体色素的提取及其分离方法

层析液通过毛细作用扩散到色素线上时将色素溶解在层析液中，它们的溶解度是不一样的，层析液在纸上继续向前扩散的时候，会不断挥发，因此其溶剂量会不断减少，那么溶解度低的色素就会首先被析出呈现在纸上，而溶解度高的随着层析液继续往前扩散，在前面一点的地方析出。
至于为什么不会在相隔的两条带之间有色素，是因为层析液是缓慢减少的，而每一种色素其析出的浓度只有一个，所以只会形成一条带。
你可以这么理解，层析液就像一辆公交车，在起点站载上了4种色素，每一种色素只能根据其自身性质在某一个站下车，所以走过的痕迹中只有刚好达到某种色素析出的条件时才会析出沉淀到纸上。其他的地方层析液走过的时候确实带着色素，但是色素这个时候处于可溶状态，并不会在纸上留下痕迹。

1. 叶绿体色素的提取

（1） 取菠菜或其他植物新鲜叶片4-5片（2g左右），洗净，擦干，去掉中脉剪碎，放入研钵中。

（2） 研钵中加入少量石英砂及碳酸钙粉，加2-3ml 95%乙醇，研磨至糊状，再加10-15ml 95%乙醇，离心35min，提取上清液过滤于三角瓶中，残渣用10ml 95%乙醇冲洗，一同过滤于三角瓶中。

（3） 如无新鲜叶片，也可用事先制好的叶干粉提取。取新鲜叶片（以菠菜叶），先用105℃杀青，再在80℃下烘干，研成粉末，密闭储存。用时称叶粉2g放入小烧杯中，加95%乙醇20-30ml 浸提，并随时搅动。待乙醇呈深绿色时，滤出浸提液备用。

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2. 叶绿体色素的分离

（1） 取圆形定性滤纸一张（直径11cm），将其剪成滤纸条（9cm×3cm），用滴管吸取乙醇叶绿体色素提取液，沿纸条的长度方向涂在纸条的一边（距边约1cm），使色素扩散的宽度限制在0.5cm以内，风干后，再重复操作数次。

（2） 在层析缸中加入适量的推动剂，将滤纸条带有色素的一端插入层析缸中，使滤纸条下端浸入推动剂中。迅速盖好层析缸盖。此时，推动剂借毛细管引力顺滤纸条向上扩散，并把叶绿体色素向上推动，不久即可看到各种色素的条带。

（3） 当推动剂前沿接近滤纸边缘时，取出滤纸，风干，即可看到分离的各种色素：叶绿素a为蓝绿色，叶绿素b为黄绿色，叶黄素为鲜黄色，胡萝卜素为橙黄色。用铅笔标出各种色素的位置和名称。

由上面的原理知道,在纸层析过程中,滤液细线中的色素是不会向下跑的,而是在毛细管拉力的作用下不断向上跑,又因为不同的色素的分配系数不同,跑的距离也就不同.纸是用植物纤维做的,植物纤维里有毛细管,这是形成毛细拉力的先决条件,植物为什么可以将水分运送到高达数十米甚至数百米的树顶,就是因为毛细管的拉力作用,制成纸后,这种拉力依然存在.