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恒远提供胰蛋白酶解离法检测HBsAg-CIC
更新时间:2013-06-03      阅读:1683

 

恒远提供胰蛋白酶解离法检测HBsAg-CIC
 
    用3.5%PEG选择性地沉淀血清中CIC,继之用胰蛋白酶消化沉淀物中的抗体蛋白,分离出抗原部分,用反向间接血凝法测定HBsAg滴度。与不加胰蛋白酶的对照管比较,如HBsAg滴度升高,则说明有HBsAg-CIC的存在。
 
1.试剂
    ①pH8.4硼酸盐缓冲液(BBS):配制法同*节中PEG沉淀试验;
    ②7%PEG及3.5%PEG溶液:用BBS配制;
    ③10mg/mL胰蛋白酶溶液:用pH8.2巴比妥缓冲液配制。
 
2.操作步骤
    (1)在测定管与对照管内务加待测血清0.2mL。
    (2)两管各加pH8.4BBSl.8mL,将血清作1:10稀释。
    (3)各加7%PEG 2mL,充分混匀后,4~C冰箱放置18h。
    (4)在10%左右条件下2 500r/min离心20min,弃上清
    (5)将沉淀物悬浮于4mL 3.5%PEG溶液中,2 500r/rain离心20min,弃上清。
    (6)于测定管中加入0.2mL胰蛋白酶溶液,对照管加0.2mLBBS,混匀后置37%水浴30rain,其间振荡3—4次。取出后,立即置56%水浴5min。
    (7)将测定管、对照管及未经处理的血清分别作系列倍比稀释,用反向间接血凝试验检测HBsAg滴度。
3.临床意义  胰蛋白酶解离法检测HBs-Ag-CIC简便而敏感,有助于确定乙肝病程中有无抗原特异性复合物形成,估计是否有可能形成肝外系统病变。
 4.结果判断
    ①测定管HBsAg滴度在1/16以上,且滴度高于对照管1个稀释度以上者为HBsAg-CIC阳性;
    ②测定管与对照管HBsAg滴度相同,但其滴度高于血清游离HBsAg1个稀释度以上者也为HBsAg-CIC阳性。
 
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