细胞DNA转染方法
对于大部分的细胞系， DNA与DNAfect的比例在1:2至1:3时转染效率较高。为了提高转化效率、表达水平并且减少细胞毒性，实验应在细胞密度较大时进行转染。以下操作以24孔板每孔细胞的DNA转染操作为例。
1. 贴壁细胞：转化前一天，在24孔板的每孔中加入500 μl无抗生素的生长培养基，并于每孔中接种0.5-2×105个细胞，待细胞长至80-90%满时进行转染。
悬浮细胞：在细胞转染之前，在24孔板的每孔中加入500 μl无抗生素的生长培养基，并于每孔中接种3-5×105
个细胞。
2. 转染当天，首先准备转染复合物，对于每孔细胞按照以下用量配制：
a. 取适量DNA，加入25 μl无血清培养基，并轻轻的混合均匀。
b. 取适量DNAfect，加入25 μl无血清培养基，轻轻混匀，并于室温孵育5分钟。
c. 孵育5分钟之后，将稀释的DNA和稀释的DNAfect混合（使DNA以及DNAfectin的终总体积为50 μl），轻轻 混合均匀，并在室温下孵育20分钟（溶液可能会出现絮状，但不会影响转染效率） 注意：该混合物在室温下可以稳定保存6小时。
3. 将步骤1中24孔板中培养的细胞生长培养基更换成450 μl无血清培养基，然后将步骤2中50 μl转染复合物加入到
24细胞孔板内，轻轻前后推动24孔板以混匀。
4. 将细胞置于含5%CO2，37℃条件下培养4-6小时后，更换成500 μl生长培养基。
5. 18-48小时后进行转染基因表达的检测。
6. 对于稳定的细胞系：在转染24小时后，细胞按照1:10的比例传代，第二天可加入筛选培养基进行筛选。
注：（1） 该说明为一个24孔的用量，若同时转几个孔，配制转染复合物的量需加倍；若转染其他类型孔板，DNA和DNAfect用量见附表，该附表用量以293T细胞为转染细胞时的标准用量。
（2） 转染4-6小时后也可以不更换生长培养基，但由于DNAfect具有一定的细胞毒性，作用时间过长可能使某些细胞出现大量死亡现 象，建议更换生长培养基。
（3） 优化条件：想要得到更高的转染效率，应优化转染条件：培养物、DNA浓度、细胞数和细胞与DNA复合物的孵育时间等条件都 应进行优化。
更新时间：2013-06-06 
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