越来越多的证据指出晚期糖基化终端产物（AGEs）修饰蛋白严重影响到老龄化人群的健康问题。AGEs是葡萄糖与自由的蛋白质氨基基团发生非酶促糖基化反应的终端不可逆代谢产物的总称。其在人体内的积累会引发组织或器官一系列的病理性变化，从而导致白内障、阿尔茨海默氏病、骨关节炎、心功能不全等疾病发生。糖尿病（高血糖）病发也与AGE在体内积累速度加快有关。

研究发现AGEs的来源主要是葡萄糖，还有二羰基化合物、短链还原糖和葡萄糖的其他代谢途径。目前确定结构属于AGE的单体化合物有CML、CEL、Pentosidine, Pyrraline, Imidazolone, Crosslin等，针对这些化合物和AGEs、AGE1～4生产的抗体大量应用于生命科学和医学领域，发表的相关论文一一都证实了AGEs是老化、与老化相关的慢性疾病发生的重要影响因素。

上海恒远生物科技有限公司晚期糖基化终端产物（AGEs）试剂盒*，提供技术指导。您的咨询与订购，：手机：何

检测原理

葡萄糖来源的AGEs （Glc-AGEs）ELISA试剂盒利用的是基于“三明治”原理的固相酶联免疫吸附试验（ELISA）。如右图所示，96孔板的表面有一层单克隆抗体涂层可直接识别样品中Glc-AGEs的特异性抗原位点，然后使用HRP标记的anti-AGE抗体结合Glc-AGEs形成“三明治”复合物，zui后酶显色对样品进行定性和定量研究。

检测对象

人或其他动物的纯化蛋白、血浆、血清和细胞裂解液。

试剂盒成分

（1） Antibody coated microtiter plate, 96 wells, 1 plate

（2） Glucose-derived AGEs standard, 250 uL×2

（3） Reference standard and sample diluent, 15 mL×1

（4） HRP- anti AGEs antibody concentrate（×100）, 60 uL×1 （mouse monoclonal antibody）

（5） OPD （o-phenylendiamine） tablets, 2 tab.

（6） Substrate solution, 30 mL×1

（7） Stop solution, 15 mL×1

（8） Wash buffer concentrate （×20） , 30 mL×1

（9） Dilution plate, 1 plate

实验准备

工作液配制	清洗液	使用前确保wash buffer浓缩液内无结晶颗粒，往30 ml的浓缩液内加入570 ml去离子水即为工作液，此溶液可以保存在2-8℃zui多放14天。
	抗体稀释液	用10倍体积的清洗液稀释"Reference standard and sample diluent"即可。
	标准溶液	用等体积"Reference standard and sample diluent" 稀释"Glucose-derived AGEs standard"（500ng/ml），如下图所示，依次配成250, 125, 62.5, 31.25, 15.63, and 7.82 ng/ml的溶液。
	HRP标记-AGEs 抗体（100×）	用5 ml 的抗体稀释溶液稀释50ul 的HRP-anti AGEs antibody浓缩液，稀释后的抗体不能保存。
	显色液	在使用前加1片OPD tablet到13 ml 底物溶液即可，此溶液需现配现用。
待测样品的准备		用"Reference standard and sample diluent"稀释样品，若样品浓度非常高，需用PBS进行预稀释，zui后再调整浓度至100×或更高。

实验准备

1	96孔板准备	加入300 ul的清洗液至每个孔内，温育30 min；*倒掉孔内溶液后，再加入300ul 清洗液。再重复此步2次。
2	一抗反应	按50 ul/孔的量加入标准溶液、稀释样品孵育1 hour，可以做两个平行。孵育完成后吸去反应液，用300 ul清洗液清洗3次。
3	二抗反应	加50 ul/孔的100倍稀释的HRP- anti AGEs antibody，孵育1 hour。孵育完成后吸去反应液，用300 ul清洗液清洗3次。
4	显色	加100 ul/孔显色液，孵育10 min；
5	终止反应	加100ul/孔终止液终止酶显色反应；
6	读取吸光度	酶标仪在490 nm下读取吸光值；
7	计算结果	使用标准曲线计算出AGEs的浓度，使用4-Parameter Logistic Model分析数据。

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