平滑肌细胞的生物学特性培养技术

1 平滑肌细胞的生物学特性
1.1平滑肌细胞生长过程：不同种类的平滑肌细胞培养具有相似的生长过程。贴块法培养的平滑肌细胞，3～7d开始以垂直方向从组织块边缘迁移萌出；6～7d细胞进入对数生长期；7～10d当组织块中大部分细胞萌出后，组织块便自行脱离，其周围细胞密度更加增大，部分区域细胞相互接触交替生长，出现“峰-谷”结构（峰：即多层细胞丘，可达8～10层，谷：即稀疏排列的单层细胞处，甚至无细胞处），这是平滑肌细胞的特征性生长表现；10～14d细胞相互融合。传代细胞的生长特性与原代细胞基本相同，细胞传代的间隔期一般为6～9d，传代开始时细胞呈圆形，不透明，边缘清楚，而后逐渐伸展贴壁，透明度增高，周界不清，呈典型“峰-谷”样生长。
酶消化法培养的平滑肌细胞，培养1d后，大部分细胞已贴壁，换液后继续培养3d，贴壁细胞*伸展，多数呈长梭型，细胞伸出较长的突起相互接触，部分区域可见典型的“峰-谷”结构，培养7～9d细胞铺满瓶底。培养细胞达铺满状态所需时间与细胞活力和细胞接种密度有关，细胞活力愈大，接种密度愈大，达到铺满状态所需时间愈短。
1.2平滑肌细胞形态学特征：许多研究证实，体外培养的平滑肌细胞具有与体内平滑肌细胞相同的形态学特征。倒置显微镜下观察细胞形态，未贴壁前细胞呈圆形或椭圆形，胞质密度高，不透明，胞核多为卵圆形，有多个核仁，贴壁后细胞胞质透明，彼此融合在一起，细胞呈梭形或多角形，核居中央，呈椭圆形。透射电镜下观察，细胞呈不规则形态，核呈锯齿状，胞浆内含平滑肌细胞特征性结构肌丝和密体，粗面内质网扩张，游离核糖体丰富，基膜下有密斑。扫描电镜下可见细胞呈带状，平行排列，细胞周边常发出许多丝状突起与相邻细胞的丝状突起交织成网状。此外，在细胞表面还可见许多疏密不等的小泡，可能为平滑肌细胞收缩运动时胞浆外突的形态表现。
2 平滑肌细胞培养技术
有文献认为组织块+酶消化法，能够缩短培养时间，更易获得大量较纯的原代细胞，方法是：将剪碎的平滑肌组织块用0.1%胶原酶37℃消化 0.5～1h后，再接种于培养瓶壁上，37℃培养箱中静置2～4h，待组织块贴壁牢固后，再补加含胎牛血清的培养液，37℃继续静置培养。此种方法细胞游出贴壁时间比传统组织块法短1～2d，可能是由于组织块被胶原酶消化后其细胞间质变得疏松，细胞容易挣脱间质束缚而萌出的缘故[6] （唐槐静，段胜仲，等。胎儿动脉平滑肌细胞培养方法的研究。湖北医科大学学报，1999，20（2）：89）
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