恒远技术分析：elisa实验阴性对照需要做梯度稀释吗

上海恒远生物科技有限公司主要ELISA试剂盒，主要合作对象是学校，医院、研究所等科研单位。学校客户以新手为主。所以常有客户咨询未处理阴性对照需要做梯度稀释吗：以小鼠血清为例，小鼠的血清是直接拿来作为阴性对照，还是要进行稀释？如果要稀释，该怎么稀释才科学？

从理论上说，阴性对照的血清，不论稀释多少倍，OD值都不应该有明显变化。有两种可能：

1.正常小鼠本身含有该抗原的抗体；

2.ELISA过程中非特异性反应去除不干净，如洗板、孵育温度时间、抗原抗体浓度等，这样稀释倍数越高的样本其对结果的影响就越小，就呈现逐渐下降的趋势。你的阴性孔的OD值有多少呢，正常情况应低于0.1，不然就要优化下整个实验体系了。
判断阴阳性，以阴性OD值的2倍作为判断标准只是根据我们一般的经验而定，更科学的方法是，测定一批阴性样品（比如20个以上），计算OD平均值及标准差，以平均值+2或3倍标准差作为阴阳性的界限。

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